蛋白磷酸化是重要的共价翻译后修饰,可以改变蛋白质的结构构象,并调控靶蛋白的功能,位置和特异性结合。许多细胞过程受蛋白质的可逆磷酸化调控,30%的蛋白质可能在其存在过程中被磷酸化。
由于内源性蛋白的产生和降解处于平衡状态,因此在稳定的环境条件下其细胞水平是稳定的。细胞粗提取物含有许多内源性酶,例如磷酸酶和蛋白酶,其能够降解和改变提取物中的蛋白。提高完整蛋白产量的最佳方法是加入这些酶的抑制剂。
更多的抑制剂意味着更好的磷酸化保护。我们提供两管具有不同溶液形式的抑制剂,帮助您更好地抑制磷酸酶。
管A(即Phosphatase Inhibitor Cocktail 1,货号K1012)抑制碱性磷酸酶的L-同功酶和丝氨酸/苏氨酸蛋白磷酸酶,例如蛋白磷酸酶1和2A(PP1和PP2A)。管A 含有Cantharidin、Bromotetramisole和Microcystin LR,以DMSO的即用溶液提供。
管B(即Phosphatase Inhibitor Cocktail 2,货号K1013)抑制酪氨酸蛋白磷酸酶,酸性磷酸酶和碱性磷酸酶。管B含有Sodium orthovanadate、Sodium molybdate、Sodium tartrate、Imidazole 和 Sodium Fluoride,以ddH2O的即用溶液提供。
在室温下解冻,然后在实验前以1:100(v / v)稀释至溶液样品(如细胞裂解物或组织提取物)依次加入A管和B管:加A管,混匀;再加B管,混匀(不可将A管和B管混合后再一起加入)。
WB,Co-IP,pull-down,IF,IHC,kinase assay等。
Tube # | Product Name | Summary | Targets | CAS Number | Smiles |
A (100X in DMSO) | |||||
Cantharidin | 蛋白磷酸酶1/2A抑制剂 | Natural Products | 56-25-7 | O=C([C@@]1(C([H])([H])[H])[C@]2(C([H])([H])[H])[C@@]3([H])O[C@]1([H])C([H])([H])C3([H])[H])OC2=O | |
(-)-p-Bromotetramisole Oxalate | ALP抑制剂 | Others|Others | 62284-79-1 | BrC(C=C1)=CC=C1[C@H]2N=C3SCCN3C2.OC(C(O)=O)=O | |
Microcystin-LR | 蛋白磷酸酶PP1/PP2A抑制剂 | Chromatin/Epigenetics|Protein Ser/Thr Phosphatases | 101043-37-2 | CC1C(NC(=O)C(NC(=O)C(C(NC(=O)C(NC(=O)C(NC(=O)C(=C)N(C(=O)CCC(NC1=O)C(=O)O)C)C)CC(C)C)C(=O)O)C)CCCN=C(N)N)C=CC(=CC(C)C(CC2=CC=CC=C2)OC)C | |
B (100X in ddH2O) | |||||
Sodium Orthovanadate | PTP抑制剂 | Membrane Transporter/Ion Channel|ATPase | 13721-39-6 | [O-][V](=O)([O-])[O-].[Na+].[Na+].[Na+] | |
Sodium molybdate | 酸性和磷蛋白磷酸酶抑制剂 | 7631-95-0 | [O-][Mo](=O)([O-])=O.[Na+].[Na+] | ||
Sodium tartrate | 酸性磷酸酶抑制剂 | 868-18-8 | C(C(C(=O)[O-])O)(C(=O)[O-])O.[Na+].[Na+] | ||
Imidazole | 碱性磷酸酶抑制剂 | 288-32-4 | C1=CN=CN1 | ||
sodium fluoride | 酸性磷酸酶抑制剂 | 7681-49-4 | [F-].[Na+] | ||
-20°C条件下储存,稳定保存12个月以上。当在2-8°C条件下储存时,该产品可稳定保存2个月。 |
1)Q:可否将A、B两管产品混合后再加入裂解液中?
A:将A管和B管预先混合会形成浅绿色的沉淀,该沉淀主要是析出的盐类,沉淀会同时影响A管的盐类和B管的天然化合物。这些沉淀无法完全重新溶解。因此需要避免这种混合方式,而是按照说明书分别加入两管产品。
2)Q:Western Blot实验时磷酸化蛋白和非磷酸化蛋白的条带都非常弱应该怎么解决?
A:首先保证蛋白上样量足够;其次,需要同时加入蛋白酶抑制剂Cocktail和磷酸酶抑制剂Cocktail来保护蛋白不被降解。
3)Q:为什么A管的融化时间比B管的长?
A:因为A管的溶剂是DMSO,B管的溶剂是ddH2O,相比之下DMSO融化的速度更慢,特别是在低温条件下。可采用在25°C水浴中融化,亦可将A管分装成多个小管。